乳酸脱氢酶B基因的克隆及其活性分析

摘要

目的 构建带Flag标签的乳酸脱氢酶B(lactate dehydrogenase B,LDHB)基因的真核表达载体,鉴定其表达产物的生物学活性.方法 采用PCR技术从人乳腺文库扩增LDHB基因,将其克隆到pCDH-EF1-MCS-T2A-puro载体中,酶切和测序验证后,转染人胚肾293 T细胞,通过蛋白质免疫印迹鉴定其表达;转染人肝癌HepG2细胞,采用酶和底物反应的方法检测乳酸含量,并通过生长曲线研究LDHB对肝癌细胞生长的影响.结果 将人乳腺文库扩增得到约1000 bp的cDNA片段克隆到pCDH-EF1-MCS-T2A-puro载体上,测序结果与目的序列完全一致;转染人胚肾293T细胞后,LDHB基因表达成功;乳酸含量测定结果显示,LDHB促进了肝癌细胞乳酸的生成;还可促进肝癌细胞的生长.结论 成功构建了pCDH-Flag-LDHB真核表达载体,表达的LDHB具有生物学活性,为进一步研究LDHB在低氧和肿瘤发生发展中的功能奠定了良好基础.