表皮葡萄球菌D-(+)-乳酸脱氢酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

摘要

本文利用PCR方法从表皮葡萄球菌基因组DNA中扩增到两条D-乳酸脱氢酶基因(SE2074，SE2121),并连接到载体pET-15b上,构建表达质粒pET-15b-SE2074和pET-15b-SE2121.将重组质粒分别转入大肠杆菌Rosseta(DE3)中,重组菌株经IPTG诱导表达.SDS-PAGE电泳分析表明两条D-乳酸脱氢酶基因在大肠杆菌中实现了表达,表达产物的分子量均约为37 kDa.以丙酮酸为底物,测定重组D-乳酸脱氢酶的酶活.经过诱导表达条件的优化后,测得重组菌株pET-15b-SE2074/Rosseta(DE3)的比酶活为326.2U/mg,重组菌株pET-15b-SE2121/Rosseta(DE3)的比酶活为4.8 U/mg.另外,在酶反应过程中,PO43-离子可以有效的提高酶的活性.