基于差异蛋白质组学技术解析xCT缺陷诱导的细胞死亡机制

摘要

目的：对Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞进行高分辨率差异蛋白质组学分析，探讨xCT缺陷引起细胞生长抑制的机制。方法分离Sut黑色素细胞和野生型黑色素细胞总蛋白，进行双向电泳和串联质谱分析，获得数值经Mascot软件处理后通过NCBI及Swiss-Prot蛋白质数据库检索，结合双向凝胶电泳相应点的表观等电点、相对分子质量、匹配肽段的多少和序列覆盖率等综合分析筛选差异蛋白质；逆转录-PCR分析Sut细胞差异蛋白mRNA表达水平，用蛋白免疫印迹法对xCT缺陷的Sut黑色素细胞进行自体吞噬分析。结果与结论得到20个明显上调或下调的蛋白，经MALDI-TOF质谱分析鉴定差异蛋白质，发现与自体吞噬和囊泡运输相关的调控因子（ Anxa3、Hist 1h2bk、NDRG1、CaM）以及与细胞转移相关的调控因子（S100A-4、S100A-6、波形蛋白）表达发生了改变；对自噬标志蛋白分析发现，在xCT缺陷的Sut细胞中发生了自体吞噬。结果表明，xCT缺陷可能通过与细胞外基质的黏附异常以及激活Sut黑色素细胞中自噬相关的信号通路，从而导致细胞的生长抑制和自噬性死亡。