软骨细胞在微载体中的培养和快速扩增技术方法

摘要

目的:探索在短期内获得大量成活率高、分化良好的兔关节软骨细胞的方法.方法:应用胰蛋白酶、胶原酶消化的方法从新生新西兰兔关节软骨处分离、培养软骨细胞,并将获得的软骨细胞在旋转生物反应器(RCCS)内应用Cytodex-3微载体进行培养.应用倒置显微镜和扫描电镜对微载体表面的软骨细胞进行动态观察,并对收获的软骨细胞进行Ⅰ、Ⅱ型胶原的细胞免疫化学染色分析.结果:关节软骨细胞可快速贴附于Cytodex-3 微载体表面,细胞伸展后生长加速,到培养后期,细胞密度可达最初接种的20倍.在微载体上收获的软骨细胞Ⅰ型胶原的免疫细胞化学染色呈阴性,Ⅱ型胶原染色则呈强阳性.结论:微载体细胞培养技术是一种简便、快速的体外细胞扩增方法,可为构建组织工程化人工软骨提供大量软骨细胞.