登革2型病毒43株NS1基因的克隆及在真核细胞中的表达

摘要

目的 :研究含登革 2型病毒 4 3株 （D2 4 3）NS1基因的重组质粒DNA在幼地鼠肾细胞BHK 2 1的表达。方法 :将含信号肽的NS1基因片段插入到pcDNA3.1的KpnⅠ位点和EcoRⅠ位点之间 ,获得重组表达载体pcDNA NS1。用电穿孔法将其导入BHK 2 1细胞 ,G4 18选择培养。挑取单细胞克隆 ,RT PCR及蛋白质印迹法鉴定NS1基因的稳定表达。结果 :在随机挑取的 5个单细胞克隆中 ,有 4个克隆的RT PCR鉴定为阳性 ,蛋白质印迹结果表明NS1基因获得表达。结论 :构建的pcDNA NS1质粒在BHK 2 1细胞中有稳定表达 ,因此含NS1基因的该重组质粒DNA可用作核酸免疫