猪血小板膜糖蛋白的纯化与鉴定

摘要

目的:分离纯化猪血小板膜糖蛋白并对其进行鉴定.方法:差速离心法分离猪血小板,1%TritonX-100溶解膜糖蛋白,麦胚凝集素亲和层析纯化糖蛋白(0.3 mol/L N-乙酰葡萄糖胺洗脱),用鼠抗人GPⅠb单抗PHN89作点印迹, 聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝(Coomassie blue, CB)和过碘酸-Schiff(PAS)染色鉴定糖蛋白,腺苷二磷酸钠盐(ADP)和瑞斯托菌素(ristocetin)诱导的人血小板聚集测定其体外活性.结果:用GPⅠb单抗PHN89为一抗的点印迹表明0.3 mol/L N-乙酰葡萄糖胺能充分洗脱结合到凝集素上的GPⅠb.PAS法糖定性有2条显色条带,SDS-PAGE纯化后有2条蛋白区带.ADP阳性对照血小板聚集率为74%,纯化前后的样品血小板聚集率分别为42%和4%, ristocetin阳性对照血小板聚集率为100%,纯化前后的样品血小板聚集率分别为25%和3%,表明制备的血小板糖蛋白具有生物学活性.结论:得到了较纯的血小板膜糖蛋白,为血小板膜糖蛋白的进一步研究及应用奠定基础.