金黄色葡萄球菌Hfq蛋白体外聚体生成和生物学功能的研究

摘要

目的:研究金黄色葡萄球菌中Hfq蛋白的聚体形式以及聚体和单体的不同生物学功能.方法:利用pET28-(a)载体克隆表达金葡菌来源的Hfq蛋白,通过天然凝胶电泳和SDS-PAGE检测不同条件下Hfq蛋白的存在形式.通过点突变的方法获得56和63位突变的Hfq蛋白,利用凝胶阻滞试验检测单体和聚体的RNA结合活性.结果:Hfq蛋白以单体、二聚体、四聚体以及六聚体的形式存在,各种聚体比例不同,长时间的高温、强酸和强碱会影响聚体的稳定性.在常规SDS-PAGE条件下,重组蛋白仅以四聚体形式存在.突变体蛋白不能够形成聚体且只有形成聚体的Hfq蛋白才能特异结合RNA.结论:Hfq蛋白形成聚体的过程是二聚体四聚体六聚体,且不同聚体形成的机制不同.56位和63位酪氨酸是Hfq蛋白聚体形成的关键氨基酸.聚体结构对Hfq蛋白发挥RNA伴侣分子生物学功能至关重要.