甘草酸二铵对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害保护作用的实验研究

摘要

目的探讨甘草酸对马兜铃酸(aristolochic acid, AA)肾损害的保护作用,观察甘草酸是否可以减轻AA对培养的肾小管上皮细胞的损害,并初步探讨其可能机制.方法 5%FCS RPMI-1640培养肾小管上皮细胞株(LLC-PK1),采用结晶紫染色法观察细胞增殖;荧光染色观察活细胞数目;酶动力学检查LDH活性,比色法检测NAG水平;透射电镜观察细胞超微细胞结构.结果①AA40、80、160μg/ml可明显抑制细胞增殖,结晶紫OD值显著减少,与无AA对照组比较P＜0.01.②甘草酸二铵(diammonium glycyrrhizinate, DG)在5、10、25μg/ml时结晶紫OD值与无甘草酸对照组比较P＞0.05,甘草酸在50μg/ml时P＜0.05,100μg/ml、200μg/ml时P＜0.01,提示大剂量甘草酸可改善AA抑制细胞增殖的作用.③在AA40μg/ml作用下随着时间延长,无甘草酸组的细胞存活数目逐渐减少,而甘草酸(100μg/ml、200μg/ml)作用组,活细胞数目明显增多,提示高浓度甘草酸对细胞损伤有一定的保护作用.④甘草酸在5、10、25μg/ml时,LDH释放率、NAG酶水平与无甘草酸对照组比较P＞0.05,甘草酸在50μg/ml时P＜0.05,甘草酸在100μg/ml、200μg/ml时LDH释放率、NAG酶明显减少,与无甘草酸组比较P＜0.01.提示大剂量甘草酸可减轻AA的细胞毒作用.⑤细胞超微结构观察:AA 40μg/ml作用24小时后,细胞超微结构发生显著改变,以核变异最突出,和线粒体肿胀等严重细胞损伤改变.甘草酸100μg/ml、200μg/ml组上述改变均较轻微.结论甘草酸(100μg/ml、200μg/ml)对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害有一定的保护作用,可明显改善AA对细胞增殖的抑制作用;减轻AA的细胞毒作用;改善细胞超微结构变化,结果提示甘草酸对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害有积极保护作用.