人肠道病毒D68型5'UTR间隔区域对下游基因表达的影响

摘要

[背景]人肠道病毒D68型(EV-D68)属于小RNA病毒科肠道病毒属人肠道病毒D组,在2014年8月至2015年1月间,该病毒引起的感染在北美显著增多,我国也出现流行.相对于原始的Fermon毒株,流行株5'UTR区域几乎都存在一两处缺失,在起始密码子ATG前还存在两处ataaca重复序列,这两处位点的功能尚未见报道.[目的]探讨流行株5'UTR区域的缺失对下游基因表达的影响,以及ataaca重复序列的功能.[方法]通过序列比对分析现阶段流行株与原始毒株Fermon株5'UTR的差异以及保守区域,利用分子生物学方法缺失上述区域后,利用双荧光素酶报告系统分析5'UTR中上述区域对下游报告基因的影响.[结果]序列比对分析发现,目前流行的EV-D68毒株在对应于Fermon株基因组5'UTR的685-707区域发生了23个碱基的缺失,而部分毒株还在718-729区域发生了第二处缺失.荧光素酶结果显示,仅第一处缺失可以极大地提高下游基因的表达量,同时具有两处缺失则与野生型几乎相当,而仅缺失第二段序列则降低了下游基因的表达量.此外,还发现第一处缺失中的序列可能对下游基因表达起到了抑制作用,而靠近起始密码子的ataaca序列作用尚不明确.[结论]目前流行的EV-D68毒株在5'UTR区域大多出现了一两处缺失,第一处缺失极大地增强了下游报告基因的表达,而第二处缺失具有相反的功能,这一现象可能与起始密码子前的两处ataaca重复序列有关.