应用实时荧光定量PCR方法定量检测双歧杆菌对Caco-2细胞的黏附

摘要

[目的]采用实时荧光定量PCR的方法定量分析黏附于Caco-2细胞的双歧杆菌,并建立一种快速有效分离黏附于细胞的细菌的方法.[方法]采用Triton X-100溶液处理黏附于Caco-2 细胞上的菌体,确定获得最佳分离效果的处理时间;建立实时荧光定量PCR定量检测双歧杆菌的方法,获得标准曲线,进行特异性、灵敏度、重复性评价;应用建立的方法分析11株双歧杆菌对Caco-2细胞的黏附能力.[结果]Triton X-100处理黏附于Caco-2细胞的双歧杆菌的最佳作用时间为10 min.实时荧光定量PCR定量检测双歧杆菌的方法重复性好、特异性强、灵敏度高;起始模板浓度范围在104-108 CFU/mL之间具有良好的线形关系,相关系数＞99％,在该浓度范围线性方程为:y=-3.345 2x+37.637 0.应用建立的方法定量分析双歧杆菌的黏附能力,与直接镜检法相比差异不显著(P＞0.05),检测时间由48 h缩短至4h.[结论]Triton X-100分离处理结合实时荧光定量PCR方法是一种快速、有效的检测双歧杆菌对Caco-2细胞黏附能力的方法.