miR-17-5p通过靶定PTEN调节结肠癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的研究

摘要

目的探讨miR-17-5p对结肠癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,以及miR-17-5p靶基因的确定及功能。方法实时定量聚合酶链反应（PCR）检测结肠癌组织和癌旁组织中miR-17-5p的表达情况。将miR-17-5p类似物（mimics）和miR-17-5p反义寡核苷酸（ASO）以及对照质粒分别转染SW620和SW480细胞系,通过噻唑蓝（MTT）比色法和克隆形成能力检测细胞的增殖能力,利用Transwell小室检测细胞的体外侵袭和迁移能力。利用生物信息学预测miR-17-5p的靶基因,并应用荧光报告载体,实时定量PCR和Western blot方法对靶基因进行验证。最后将靶基因的过表达质粒pc DNA3/PTEN转染细胞,检测细胞的增殖、体外侵袭和迁移能力。结果与癌旁组织相比,miR-17-5p在癌组织中表达增高（P＜0.01）;转染miR-17-5p后,SW620和SW480细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力与对照组相比显著增强（P＜0.01）,ASO封闭miR-17-5p表达后,SW620和SW480细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力下降（P＜0.01）。过表达miR-17-5p可以抑制含miR-17-5p结合位点荧光报告载体的强度（P＜0.01）,将结合位点突变后抑制作用则显著减弱。过表达miR-17-5p可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制PTEN的表达（P＜0.01）,而用ASO封闭miR-17-5p的表达后PTEN的表达则升高（P＜0.01）。细胞转染过表达PTEN的质粒后,SW480和SW620细胞活性、克隆形成能力、侵袭和迁移能力减弱（P＜0.01）。结论 PTEN是miR-17-5p的直接靶基因,miR-17-5p通过抑制PTEN的表达而促进结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移。