白念珠菌烯醇化酶1的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

目的构建白念珠菌烯醇化酶1（eno1）基因的原核表达质粒并诱导其表达,制备其多克隆抗体。方法聚合酶链反应（PCR）获取白念珠菌SC5314的eno1全长基因,克隆入原核表达载体p ET30（a）,转化感受态细胞E.coli BL21（DE3）,经IPTG诱导表达后以亲和层析纯化重组蛋白并以SDS-PAGE和蛋白免疫印迹（Western blot）法鉴定。用纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备Eno多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定抗体效价,Western blot法鉴定其特异性。结果成功构建原核表达质粒p ET30（a）-eno1,诱导后表达的重组蛋白相对分子质量约为50 000,主要以可溶性上清形式存在。纯化制备的eno1多克隆抗体效价约为1︰12 800 000,可与重组Eno反应。结论成功获得白念珠菌eno1重组蛋白并制备了该蛋白的多克隆抗体。