抑制端粒酶活性的pSUPER RNAi系统的构建

摘要

目的构建抑制端粒酶活性的siRNA表达载体.方法化学合成2段编码短发夹RNA序列的、靶向端粒酶hTERT基因的寡核苷酸,各64个碱基,退火,克隆到经BgIⅡ、HindⅢ双酶切同时CIP处理后的pSUPER载体的polⅢH1启动子的下游,重组构建RNAi质粒,同时设立非特异对照.结果重组构建的pSUP-hTE载体经双酶切电泳分析及插入基因片段序列分析,结果表明64个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致.结论载体的成功构建,为进一步研究其对端粒酶活性的抑制作用打下基础.同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法,这项技术能广泛的用在分析基因功能、肿瘤治疗等,更加便捷地把RNAi技术用于细胞培养和哺乳动物研究.