PcDNA3.1-rhGM-CSF重组质粒的构建及生物活性鉴定

摘要

目的 构建PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体,初步观察其对髓系白血病细胞K562细胞生长的影响.方法 采用PCR、T-A克隆及基因定向克隆技术,将rhGM-CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体,构建了PcD-NA3.1-rhGM-CSF真核表达栽体.经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.转染人髓系白血病细胞K562细胞72h后,采用RT-PCR方法、NBT试验、MTT试验、免疫组化技术,观察和分析PcDNA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其对该细胞的影响.结论 成功构建了PcDNA3.1-rhGM-CSF真核细胞表达载体;重组质粒PcDNA3.1-rh-GM-CSF能在K562细胞中表达;部分K562细胞向单核细胞系、巨噬细胞系分化.u0000CSF基因插入PcDNA3.1(+)空载体,构建了PcD-NA3.1-rhGM-CSF真核表达栽体.经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.转染人髓系白血病细胞K562细胞72h后,采用RT-PCR方法、NBT试验、MTT试验、免疫组化技术,观察和分析PcDNA3.1-rhGM-CSF在K562细胞中的表达及其对该细胞的影响.结论 成功构u0000了PcD