构建沉默Runx 2基因的牙龈癌细胞慢病毒载体

摘要

目的筛选沉默成骨细胞特异性转录因子2(Runx2)基因的慢病毒载体,转染人上颌牙龈癌颈淋巴结转移癌细胞系GNM细胞,获得沉默Runx 2基因的GNM细胞,为探究Runx2在GNM细胞中的转录调控奠定实验基础。方法根据预实验结果在含HiTransG P的培养液中,病毒按照感染复数(MOI)10转染GNM细胞,将病毒按序号分为NC组:CON313;KD1组:LV-Runx2-RNAi(80978-1);KD2组:LV-Runx2-RNAi(80979-1);KD3组:LV-Runx2-RNAi(80980-1),使用荧光显微镜观察转染120 h后各组荧光标记基因的表达;实时PCR分析Runx2的转录产物水平,比较Runx 2基因的组间沉默效率;Western Blot进一步检测Runx2蛋白沉默效果。结果各组细胞经慢病毒转染,120 h后观察见细胞状态良好,其中NC组荧光表达未见;KD1组荧光表达较高;KD2组荧光表达最高;KD3组荧光表达较低。实时PCR分析显示Runx 2基因沉默效果最佳的为KD2组,沉默效率可达64.4%(P<0.05)。Western Blot结果显示各实验组中KD2组GNM细胞的Runx2蛋白表达最低(P<0.05)。结论成功筛选出特异性转染GNM细胞的慢病毒载体,同时初步确定转染实验相关适宜参数。