干扰lncRNA DANCR的表达增强直肠癌细胞放疗敏感性的作用研究

摘要

目的探讨长链非编码RNA分化拮抗非蛋白质编码RNA(lncRNA DANCR)对直肠癌细胞放疗抵抗的影响及其作用的可能机制。方法选择在我院新辅助治疗的直肠癌患者标本90例,qRT-PCR检测DANCR在直肠癌和癌旁组织中的表达水平,统计学分析DANCR的表达与患者放疗抵抗及临床病理参数的关系,生存分析DANCR的表达对患者预后的影响。常规培养HT29细胞,采用分次放射剂量递增建立HT29放射抵抗细胞株(HT29-R),MTS检测HT29和HT29-R细胞的放疗敏感性,qRT-PCR检测DANCR在HT29和HT29-R细胞中的表达。HT29-R细胞分为对照组(si-NC组)和干扰DANCR表达组(si-DANCR组)并进行相应siRNA转染,MTS检测干扰DANCR对HT29-R细胞放疗敏感性的影响。si-NC组和si-DANCR组细胞于辐射作用下,平板克隆检测各组细胞平板克隆形成能力,流式细胞仪检测各组细胞周期和细胞凋亡率,western blot检测各组细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6和凋亡相关蛋白caspase 3、Bcl-2、Bax的表达。结果DANCR在直肠癌组织中的表达显著高于在癌旁组织中的表达,DANCR的表达与直肠癌患者TNM分期和放疗敏感性相关(P<0.05),DANCR高表达的患者预后较差(P<0.05)。与HT29细胞相比,HT29-R细胞的放射抵抗性增加(P<0.05),HT29-R细胞中DANCR表达增加(P<0.05)。干扰DANCR增强HT29-R细胞的放疗敏感性(P<0.05)。在放射作用下,与si-NC组相比,si-DANCR组HT29-R细胞平板克隆形成能力降低(P<0.05),细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡率增加(P<0.05),细胞中周期相关蛋白cyclinD1、CDK4、CDK6表达降低和凋亡相关蛋白caspase 3、Bax表达增加,Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05)。结论DANCR通过调控细胞周期及凋亡相关蛋白增加直肠癌细胞放疗敏感性,是治疗直肠癌的潜在靶标。