乳腺癌细胞中长链非编码RNA HOTAIR和PRC2相互作用的研究

摘要

目的:检测数种乳腺癌细胞系中长链非编码RNA(long noncoding RNA,LncRNA)HOX转录反义RNA(HOX transcript antisense RNA,HOTAIR)和多梳抑制复合物2(poly-comb repressive complex 2,PRC2)的表达及相互影响.方法:在美国国立癌症研究所(national cancer institute,NCI)60细胞库,检测HOTAIR表达情况,选择高表达、低表达的乳腺癌细胞系及对照细胞系.蛋白印迹法检测这些细胞系中PRC2组件的表达,组蛋白3(histone3,H3)甲基化情况,用实时聚合酶联反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测HOTAIR与PRC2的相互影响.构建高表达HOTAIR细胞系,RT-PCR检测相关致癌、凋亡基因,用microRNA200c(miR200c)逆转.结果:通过正向、负向干预HOTAIR表达,高表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR与PRC2有协同作用,低表达HOTAIR的乳腺癌细胞中HOTAIR对PRC2有拮抗作用.PRC2复合物中,zeste基因增强子的人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)作为活性亚基表达更稳定.组蛋白3第27位赖氨酸的三甲基化(trimethyl-ation of lysine 27 on histone 3,H3K27Me3)并未在正负向干预HOTAIR后发生明显蛋白水平变化.在MDA-MB-231细胞系中,过表达HOTAIR和EZH2会使同源异形盒基因(ho-meobox D10,HOXD10)表达增高,而B细胞迁移基因2(B-cell translocation gene 2,BTG2),磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue,PTEN)基因的表达降低.过表达鼠肉瘤(rat sarcoma,RAS)基因组乳腺细胞系,HOTAIR基因表达亦增高,而BTG2基因降低.共转miR200c RAS基因的乳腺细胞系中,HOTAIR表达下调,BTG2表达上调.结论:在不同HOTAIR表达水平的乳腺癌细胞中,HOTAIR与PRC2的作用不相同,沉默彼此,对H3K27Me3无明显影响.HOTAIR和PRC2复合物会促进HOXD10基因表达,并抑制BTG2、PTEN表达.而RAS可影响HOTAIR表达,但对下游调控的作用能被miR200C逆转.