胶原沉积抑制因子cDNA的分子克隆及其在大肠杆菌DH5α的表达

摘要

目的:获取胶原沉积抑制因子(Decorin)互补脱氧核糖核酸(cDNA)并在大肠杆菌DH5α中表达出成熟蛋白.方法:用巢式逆转录聚合酶链反应(nest-RT-PCR)法从体外培养的成纤维细胞(2BS)中获取Decorin cDNA,克隆入pMD18-T载体.测序后,将成熟蛋白区亚克隆入pGEX-4T-1中,用PCR法、限制性酶切和测序对融合克隆进行鉴定.经过鉴定的融合克隆在大肠杆菌DH5α中进行表达.结果:获取的1 181 bp 的Decorin cDNA片段与基因bank中收录的序列相似性达99.75%;可从GST-Decorin成熟蛋白cDNA融合克隆中扩增出和酶切出1 005 bp的目的片段;融合克隆有完整的开放阅读框架;融合蛋白在大肠杆菌DH5α中成功表达.结论:获取了Decorin cDNA并在大肠杆菌DH5α中表达出GST-Decorin成熟蛋白.