宫颈癌细胞外泌体hsa_circ_0087432对人脐静脉内皮细胞增殖及迁移的影响

摘要

目的 分析环状RNA 0087432(hsa_circ_0087432)在宫颈癌患者血清外泌体中的表达,探讨其与宫颈癌转移可能存在的关系.方法 收集广州市番禺区中心医院2019年6月-2020年6月诊断为宫颈鳞癌且术前未行放化疗的30例患者的宫颈癌组织及血清作为实验组,另将30例未患宫颈癌的女性正常宫颈组织及血清作为对照组.采用实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测hsa_circ_0087432在宫颈癌患者与健康人宫颈组织和血清外泌体中的表达水平.通过质粒转染Siha细胞以过表达hsa_circ_0087432,将Siha细胞依不同处理分为3组:control组(未转染质粒),vector组(转染pLC5-ciR)及hsa_circ_0087432组(转染hsa_circ_0087432-pLC5-ciR),并提取各组外泌体;采用透射电镜(TEM)、纳米颗粒跟踪分析技术(NTA)及Western blotting检测外泌体表征.将人脐静脉内皮细胞按不同处理分为3组:control-Exs组(Siha细胞来源外泌体)、vector-Exs组(vector组Siha细胞来源外泌体)、hsa_circ_0087432-Exs组(hsa_circ_0087432组Siha细胞来源外泌体),采用CCK-8试剂盒检测外泌体对人脐静脉内皮细胞增殖的影响,采用划痕实验及Transwell检测外泌体对人脐静脉内皮细胞迁移的影响.结果 电镜下观察结果显示,Siha细胞的外泌体大部分呈椭圆形或圆形,粒径分析显示其直径大小分布在30～150 nm;Western blotting检测结果显示,两组囊泡中的CD9、CD81及CD63表达均呈阳性;qPCR结果显示,实验组宫颈组织hsa_circ_0087432表达量明显高于对照组(4.03±1.51 vs.1.00±0.26,P<0.01),且血清外泌体中hsa_circ_0087432表达量也明显高于对照组(1.97±0.04 vs.1.02±0.23,P<0.01).CCK-8检测结果显示,hsa_circ_0087432-Exs可明显促进人脐静脉内皮细胞增殖(1.57±0.04 vs.1.09±0.11,P<0.05).划痕实验结果显示,干预12 h后,circ_0087432-Exs组的迁移面积占比高于control-Exs组(24.66％±2.92％vs.15.01％±3.12％,P<0.05),且24 h后hsa_circ_0087432-Exs组的迁移面积占比明显高于control-Exs组(74.84％±13.22％vs.38.70％±2.12％,P<0.01).Transwell检测结果也显示,与vector-Exs组及control-Exs组比较,hsa_circ_0087432-Exs组迁移细胞数量明显增多,差异有统计学意义[分别为(1218.00±103.53)个、(1044.00±103.79)个、(1755.00±97.35)个,P<0.05].结论 hsa_circ_0087432在宫颈癌患者血清外泌体中呈高表达,且过表达hsa_circ_0087432的宫颈癌细胞来源的外泌体可促进人脐静脉内皮细胞增殖与迁移.