慢性髓系白血病bcr-abl融合基因在真核细胞中的表达

摘要

克隆慢性髓系白血病(CML)融合基因bcr-abl融合位点周围的cDNA序列,构建重组真核表达载体并表达于p815细胞，探索bcr-abl基因免疫治疗CML的可行性。设计两条引物扩增bcr-abl融合位点周围468bp的cDNA，测序正确后，将其克隆至真核表达载体pcDNA 3.1，通过电穿孔法转染至p815 细胞中，应用G418筛选阳性细胞克隆，在含10%FCS的RPMI1640中常规培养，收集细胞进行RT-PCR鉴定。结果PCR扩增出了可用于基因免疫的位于bcr-abl融合基因位点周围的468bp的cDNA，序列测定除第448位碱基C突变为T外其余序列均正确；构建了重组真核表达载体，并用电穿孔法将其转染p815细胞，RT-PCR法检测到该细胞系有bcr-abl mRNA水平的表达。