氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞内质网应激途径凋亡的影响

摘要

目的 探讨氯喹对过氧化氢诱导平滑肌细胞(SMC)内质网应激途径凋亡的影响.方法 体外培养主动脉SMC细胞,分别加入100、400和800μmol/L H2O2培养12h后,MTT法检测SMC细胞生存率.将细胞分为对照组、H2O2组、氯喹组、H2O2+氯喹组,培养12h后采用MTT法检测氯喹阻断自噬后SMC细胞的生存率,倒置相差显微镜观察H2O2对SMC细胞形态变化的影响,间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3和p62的表达,Western blotting检测Beclin-1、 LC3、GRP78、 CHOP、Caspase-3及Cleaved Caspase-3蛋白的表达.结果 MTT检测结果显示,100、400、800μmol/L H2O2作用12h后,SMC细胞存活率明显降低,IC50为447.4μmol/L;氯喹阻断自噬后,SMC细胞存活率明显降低(P＜0.05).倒置相差显微镜观察结果显示,H2O2+氯喹组SMC收缩变圆,细胞密度明显下降.激光共聚焦显微镜观察显示,H2O2与氯喹联合作后,SMC细胞质中LC3和p62蛋白表达均明显增加,且有明显共定位现象.Western blotting检测结果表明,H2O2与氯喹联合作用后,SMC中内质网应激相关蛋白GRP78、CHOP和自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ的表达明显增加(P＜0.05, P＜0.01),凋亡执行分子Caspase-3的裂解形式蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).结论 氯喹对过氧化氢诱导SMC通过内质网应激途径的凋亡具有促进作用.