肠毒素大肠杆菌LTh-STIb二价基因探针的克隆及其应用研究

摘要

在肠毒素大肠杆菌（ETEC）LTh－STIa－STIb三价基因探针的基础上，用限制性内切酶EcoRI酶切，回收片段，重新构建LTh－STIb二价基因探针的克隆株。用辣报过氧化物防复合物（HRP）直接标记二价基因探针，建立了增强型化学发光反应（ECL）检测ETEC的方法，其敏感性可测到0．1pg的质粒DNA或由10个菌体培养而来的ETEC细胞，与同位素标记杂交方法的敏感性一致，且此探针仅与产STIb、LTh肠毒素的人源性ETEC菌株杂交，与STIa肠毒素菌株及其它非ETEC菌株均无杂交信号。该探针与三公探针及LTh单价探针联合使用，能间接将LTh、STIa和STIb三种肠毒素分型。结果表明该方法简便快速、特异敏感、无放射性污染，是ETEC实验室诊断及分子流行病学调查的有效工具。