川牛膝多糖通过调控Sema7A基因的表达对病毒性心肌炎心肌细胞损伤和细胞凋亡的影响

摘要

目的:研究川牛膝多糖在病毒性心肌炎心肌细胞损伤和细胞凋亡中的作用及其机制。方法:利用柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导SD大鼠原代心肌细胞,构建病毒性心肌炎模型,并给予不同浓度的川牛膝多糖。流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法(Western blot)检测心肌细胞活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)、Sema7A蛋白表达,试剂盒检测丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性,实时荧光定量PCR(qPCR)检测Sema7A mRNA表达。在心肌细胞中转染si-Sema7A,同时进行CVB3处理,观察抑制Sema7A表达对CVB3感染心肌细胞凋亡和氧化损伤的影响。在心肌细胞中转染Sema7A过表达载体(pcDNA Sema7A),同时进行CVB3和川牛膝多糖处理,探讨过表达Sema7A对川牛膝多糖作用的CVB3感染心肌细胞凋亡和氧化损伤的影响。结果:与空白组比较,CVB3显著增加心肌细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达量、MDA含量、Sema7A mRNA和Sema7A蛋白表达量(P<0.05),明显降低SOD、CAT活性(P<0.05)。与CVB3组比较,20、40、80、160 μg/mL的川牛膝多糖显著减少CVB3感染心肌细胞的细胞凋亡率、cleaved caspase-3蛋白表达量(P<0.05),并且80 μg/mL川牛膝多糖明显降低MDA含量、Sema7A mRNA和蛋白表达量,显著提高SOD、CAT活性(P<0.05)。抑制Sema7A表达明显减少CVB3感染心肌细胞中Sema7A mRNA及蛋白表达量、MDA含量、cleaved caspase-3蛋白表达量、细胞凋亡率(P<0.05),提升SOD活性、CAT活性(P<0.05)。过表达Sema7A逆转了川牛膝多糖对CVB3感染心肌细胞凋亡和氧化损伤的抑制作用。结论:川牛膝多糖可能通过调控Sema7A表达,保护病毒性心肌炎心肌细胞损伤并抑制细胞凋亡。