32Dp210细胞稳定转染方法的比较

摘要

目的：采用3种不同的方法将质粒pEGFP-CEBP 转染32Dp210,从中寻找最佳的稳定转染的方法.方法：分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电穿孔转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的质粒pEGFP-CEBP转染32Dp210.24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞.结果：电转染有最高的瞬时转染效率（58.9%）,稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少（21d）;用阳离子聚合物瞬时转染率低（1.7%）,阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为5.8%,后面两种方法得到的阳性克隆太少,无法筛选到阳性细胞.结论：用电穿孔转染法将质粒pEGFP-CEBP 转染32Dp210是最佳的转染方法.