β分泌酶RNA干扰质粒的构建与鉴定

摘要

选择人、小鼠和大鼠的BACE1基因的共有序列为干扰的靶标,设计4对干扰片段连接至带有GFP和U6 RNA聚合酶启动子的PRNATU6.1载体.将构建好的质粒转染HEK293/细胞,通过RT-PCR和Western blotting的方法分别在RNA和蛋白水平上来检测BACEl和Aβ,以鉴定其干扰效率,并通过夹心ELISA的方法进一步在过表达蛋白APP和BACE1的HEK293T细胞体系中验证干扰质粒对Aβ1-42生成的影响.RT-PCR和Western blotting结果提示β分泌酶的siRNA能干扰BACE1和AβRNA和蛋白水平表达,效率分别达到90%和80%.Westem blotting和ELISA结果提示,β分泌酶的siRNA也降低Aβ1-42生成.