结核分枝杆菌ABC转运器胞外结构域COG1732的结晶研究

摘要

[目的]COG1732蛋白是结核分枝杆菌H37Rv菌株中的一个ATP-结合盒转运蛋白的底物结合蛋白,但其蛋白质三维结构及其生物学功能尚未明了,生物信息学分析表明COG1732蛋白可能做为参与渗透调节剂向细胞内转运过程中的底物识别过程,进一步改变跨膜结构域.本研究通过表达,纯化COG1732蛋白用于蛋白质晶体生长分析.[方法]针对结核分枝杆菌的一个ABC转运蛋白(ABC transporter)的胞外底物结合域COG1732.通过原核表达的方法,将表达COG1732的序列构建到带有T7启动子的载体pet28b,通过使用大肠杆菌表达系统BL21(DE3)大量表达COG1732蛋白.并通过镍亲和色谱和离子交换色谱的方法将COG1732蛋白纯化.将纯化好的COG1732蛋白浓缩至浓度为70mg/ml.分装保存到-80冰箱.并进行结晶条件的筛选.[结果]纯化的COG1732蛋白用悬滴气相扩散法得到了棒状晶体.[结论]成功构建了COG1732蛋白的原核表达载体、建立了表达纯化策略并获得了初步结晶的实验条件,为最终解析其三维结构奠定了基础.