鸡致病性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78)的Ⅰ型菌毛结构基因表达载体的构建及表达产物的检测

摘要

用限制性内切酶SacI和BamHI双酶切克隆有鸡致病性大肠杆菌分离株O1、O2 和O78的piliA基因的质粒pTFimO1、pTFimO2 和pTFimO78,分别回收从此 3质粒上切下的 5 45bp的piliA基因片段 ,再将载体pET -2 8a (+)用SacI和BamHI双酶切 ,最后将pET -2 8a (+)DNA片段与 5 45bp的piliADNA片段进行连接 ,转化至受体菌BL2 1 (DE3 )中 ,经SacI和BamHI酶切反应鉴定重组子 ,得到了理想重组子质粒pETFimO1、pETFimO2 和pETFimO78。重组菌株BL2 1 (DE3 ) (pETFimO1)、BL2 1 (DE3 )(pETFimO2 )和BL2 1 (DE3 ) (pETFimO78)经IPTG诱导后 ,其表达产物经SDS -PAGE检测 ,结果表明重组菌株可以良好地表达鸡致病性大肠杆菌Ⅰ型菌毛蛋白。