大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因folA的克隆、表达纯化及分子间交联

摘要

利用PCR技术从大肠杆菌DH5α中获取二氢叶酸还原酶(DHFR)基因folA.用限制性内切酶BamHI与PstI将该片段插入到克隆载体pUCl8上,DNA测序鉴定目的基因.而后再将该基因亚克隆到表达载体pTrcHisC上,IPTG诱导表达重组蛋白.在非变性条件下,用TALON金属亲和层析树脂纯化含组氨酸标记的重组DHFR.纯化产物在热诱导条件下行SDSPAGE分析,除23 00O大小的单体外,还出现了交联的二聚体和多聚体;而当反应体系中含有还原剂β-巯基乙醇时,二聚体和多聚体都被减弱.推断蛋白质在热诱导条件下二级结构发生改变而产生交联,并且有二硫键的参与.