重组人RGD-sTRAIL的表达、纯化及抗肿瘤活性研究

摘要

利用PCR技术构建RGD短肽与人肿瘤坏死因子凋亡配体(胞外区114～281)的融合基因,将该DNA片段克隆到原核表达载体pET-11a中.重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后可表达相对分子质量约为20 000的目的蛋白,占菌体蛋白的20%左右,且大多数重组蛋白以不溶的包涵体形式存在.Westem印迹表明目的蛋白具有人sTRAIL的抗原性.表达产物经变性、复性、离子交换层析和分子筛等步骤,可以得到纯度大于95%的RGD-sTRAIL重组蛋白.肿瘤细胞体外实验发现,纯化后的RGD-sTRAIL重组蛋白能明显抑制人肺癌细胞A549生长,并呈剂量依赖性.研究结果表明,通过复性,包涵体中的RGD-sTRAIL蛋白得到正确的折叠,并在体外具有杀伤肿瘤细胞的活性,从而为进一步研究体内靶向性杀伤肿瘤细胞奠定了基础.