西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因启动子区的克隆、生物信息学分析及活性研究

摘要

根据已发表的β-酪蛋白基因全序列设计合成引物,以西农萨能奶山羊乳腺组织基因组DNA为模板,通过长链PCR扩增β-酪蛋白基因组基因5'侧序列.将该序列克隆入pMD18-T载体,并对其进行序列测定.结果克隆得到西农萨能奶山羊β-酪蛋白基因-4 359至+2 106共6 465 bp序列.该序列保留β-酪蛋白第一内含子、第一外显子和第二外显子及其信号肽部分.将该序列与已公布的其他山羊β-酪蛋白基因序列进行比较,其同源性为96%～98%.生物信息学分析显示,β-酪蛋白基因启动子区包含有TATA启动子序列和HOXF、Oct-1、AP1、CEBP、STAT、NFKB、GR、ER、PR和ETS等转录因子识别位点.将此6 465 bp片段插入荧光素酶报道基因载体pGL3-Basic中,构建重组质粒pGL3/B65,瞬时转染萨能奶山羊原代培养的乳腺上皮细胞48 h后检测显示,该假设的启动子区确有启动子功能,对泌乳激素发生反应.本研究为进一步构建有效的乳腺生物反应器载体奠定了基础.