结核分枝杆菌esat6-rpfD融合基因的原核表达及产物纯化

摘要

目的:构建结核分枝杆菌融合基因esat6-rpfD的原核表达载体,表达和纯化ESAT6-RpfD融合蛋白.方法:从结核分枝杆菌H37Rv株基因组中经PCR分别扩增esat6和rpfD基因,克隆入pMD19-T载体,测序后克隆入原核表达载体pProExHTB,酶切重组质粒,转化大肠杆菌DH5a,IPTG诱导表达融合蛋白,亲和层析纯化融合蛋白.结果:PCR扩增的esat6、rtfD基因序列与GenBank报道一致;诱导表达后,经SDS-PAGE和Westem blot分析,在相对分子质量约30 000处有目的条带,融合蛋白以包涵体形式表达.结论:构建了esat6-rpfD融合基因原核表达载体,并在大肠杆菌中表达并纯化得到ESAT6-RpfD融合蛋白.