适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法

摘要

10.3969/j.issn.1009-0002.2012.05.020%　　目的：建立适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法.方法：采用酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法、三氯乙酸-丙酮沉淀法和硫酸铵沉淀等3种方法制备水稻悬浮细胞外分泌蛋白,并进行双向电泳分析；利用Western印迹对候选方法提取的外分泌蛋白进行纯度检测.另外,还利用质谱技术对从双向电泳胶上随机挑选的9个蛋白点进行测定,并用SignalP 3.0 Server对测定的蛋白点进行信号肽预测.结果：酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法提取的外分泌蛋白得率最高,且双向电泳图谱清晰,并能检测到最多的蛋白点；Western印迹表明利用该法所提取的外分泌蛋白未被细胞内蛋白质污染.利用质谱技术鉴定了随机挑选的9个蛋白点,SignalP 3.0 Server分析表明其中6个蛋白含有信号肽.结论：酚抽提结合甲醇醋酸铵沉淀法是一种适用于双向电泳分析的水稻悬浮细胞外分泌蛋白提取方法.