根据水稻叶片中各种膜囊泡所具有的不同的表面性质(如表面电荷、亲水基团等),采用双水相萃取法(Dextran T 500/ PEG 3350)进行了水稻叶片质膜的纯化。在低盐浓度下,分别选用6种不同的Dextran T 5001 PEG 3350聚合物浓度(分别为6.0%、6.1%、6.2%、6.3%、6.4%、6.5% w/w)作为双水相体系对叶片细胞质膜进行了纯化;经细胞质膜标志酶H+-ATPase的活性测定、柠檬酸铅和醋酸铀双染色以及低pH值磷钨酸染色后的电镜观察,结果表明由6.3%(w/w)Dextran T 500和6.3%(w/w)PEG 3350组成的双水相体系可获得高纯度和高质量的水稻叶片质膜。质膜蛋白质经增溶缓冲液溶解、双向电泳(IEF/SDS-PAGE )和图像分析,获得了高分辨率和重复性的双向电泳图谱,为进一步从蛋白质整体水平研究质膜蛋白质的功能提供可靠的实验材料。
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