重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测

摘要

目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗.方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简称rtIL-15);目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后,用Western印迹和HPLC进行鉴定;将rtlL-15与氢氧化铝佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫原性.结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明重组融合表达质粒pQE-30-TT-IL-15构建正确,重组蛋白的表达量达到菌体总蛋白的20％,主要以包涵体形式表达,经过纯化、复性后,目的蛋白纯度达到95％以上;蛋白疫苗免疫小鼠后,能诱导高滴度的特异性的IL-15抗体.结论:在大肠杆菌中表达了重组人IL-15融合蛋白疫苗,并具有良好的免疫原性.