重组B7-H4IgV融合蛋白的表达、纯化及免疫原性鉴定

摘要

目的：以B7-H4为靶点,研制肿瘤免疫治疗蛋白疫苗。方法：分别将人B7-H4胞外片断IgV区基因和鼠B7-H4胞外片断IgV区基因插入pQE-30原核表达载体,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达。Ni<'2+>-NTA亲和层析纯化蛋白,Western blot鉴定。用纯化的rhB7-H4IgV蛋白和rmB7-H4IgV蛋白分别免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定蛋白抗血清的生物学活性,并用两种融合蛋白分别免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察对肿瘤细胞生长产生的抑制作用。结果：所构建的pQE-30-TT-hB7-H4IgV和pQE-30-TT-mB7-H4IgV表达载体均能分别稳定地表达rhB7-H4IgV和rmB7-H4IgV蛋白,经纯化后免疫昆明小鼠,可获得高滴度rhB7一H4和抗rmB7-H4抗血清,经流式细胞术显示,其抗血清均可与SP2/0肿瘤细胞结合,且经抑瘤实验发现,rhB7-H4IgV蛋白疫苗对SP2/0移植瘤生长具有一定抑制作用。结论：rhB7-H4IgV和rmB7一g4IgV蛋白均可引发小鼠体内免疫应答,而且其抗体能与表达B7-H4的肿瘤细胞结合,rhB7-H4IgV蛋白疫苗在一定程度上能抑制SP2/0移植瘤的生长。