结核分枝杆菌ESAT-6基因的克隆与表达

摘要

目的对结核分枝杆菌的ESAT-6基因进行克隆、鉴定与表达,为结核病的诊断、重组疫苗的应用打下基础.方法以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,用聚合酶链反应(PCR)对ESAT-6基因进行扩增,将扩增的产物连接于测序载体pGEM-T上,经测序反应确定无误后,再将PCR产物与原核表达载体pET42b(+)构建表达ESAT-6的重组质粒,将重组质粒先转化入大肠杆菌DH5α内并提取质粒,经酶切鉴定后,再转化入表达宿主大肠杆菌BL21菌株内,对转化菌株进行诱导后,破菌,进行SDS-PAGE电泳.结果电泳发现转化了重组质粒的菌株有表达蛋白,其表达的蛋白质相对分子质量为9 900.结论目的基因克隆到菌株内,重组结核分枝杆菌ESAT-6的成功表达为结核病诊断、重组疫苗应用和免疫效应检测等奠定了基础.