毛细管PCR芯片电泳快速检测NDM-1耐药菌方法的建立

摘要

目的 建立一种毛细管聚合酶链反应(PCR)芯片电泳方法,实现快速、准确地检测新德里金属-β-内酰胺酶(NDM-1)耐药菌.方法 根据NDM-1基因设计1对特异引物,对临床微生物检测的80株耐药肠道杆菌和60株鲍曼不动杆菌的细菌培养液进行毛细管振荡流PCR扩增,芯片电泳快速检测PCR产物.将NDM-1阳性标本进行测序验证,同时对NDM-1阳性菌细菌悬液定量梯度稀释进行PCR,考察免核酸提取PCR的敏感度.结果 毛细管PCR芯片电泳方法检测出2例阳性标本,其产物经测序验证,确定携带NDM-1基因,阳性率为100％.该方法在40 min内实现产NDM-1耐药菌扩增产物的快速分离检测,细菌检测线为1.15×101 CFU/mL.结论 毛细管PCR芯片电泳方法检测NDM-1基因准确性高、特异性强,具有快速、廉价等特点,适合NDM-1阳性菌的早期快速现场诊断.