长爪沙鼠CST3序列同源性分析及蛋白体外表达

摘要

目的 分析长爪沙鼠半胱氨酸蛋白酶抑制剂C (Cystatin C,CST3) cDNA序列同源性,并建立CST3蛋白原核表达体系,为长爪沙鼠CST3抗体制备和后续基因功能研究奠定基础.方法 对长爪沙鼠Cst3 cDNA序列进行克隆、同源性分析及密码子优化;将优化后序列酶切连接到pET28a载体,完成重组CST3蛋白表达载体构建;将该载体转化到感受态细胞中,通过异丙基硫代半乳糖苷(Isopropylβ-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导实现CST3蛋白的原核表达,并用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blotting)验证.结果 长爪沙鼠Cst3基因与人和小鼠Cst3基因的序列同源性较低.密码子优化后的长爪沙鼠Cst3表达序列插入到pET28a质粒中,获得了CST3蛋白表达载体.经1 mmol/L IPTG 37℃诱导12h,可获得大量CST3蛋白.结论 成功地构建了长爪沙鼠CST3蛋白的体外表达体系.