小鼠嗜肺巴斯德杆菌PCR检测方法的优化及在不同样本处理中初步应用

摘要

目的 建立活体实验动物中嗜肺巴斯德杆菌的实时快速、灵敏简便的PCR检测方法.方法 通过比较不同样本采集及处理方法,优化样本的处理流程,简化DNA的提取步骤,快速获取PCR模板后对嗜肺巴斯德杆菌Jawetz型和Heyl型进行PCR扩增,并结合测序进行鉴定.结果 4种采样方法中,口腔样本的检测效果最好;2种DNA提取方法中,用培养后煮沸1min的方法能快速获取样本中细菌基因组DNA,比试剂盒提取方法效果更好.结论 通过培养煮沸1 min的方法快速提取实验动物口腔样本中的细菌基因组DNA作为PCR模板,能显著提高嗜肺巴斯德杆菌的阳性检出率.