小鼠IFN-γ基因的克隆及其分子佐剂作用的研究

摘要

目的 通过融合表达小鼠IFN-γ(MulFN-γ)与猪脑心肌炎病毒(EMCV)结构蛋白VP1研究MulFN-γ的分子佐剂作用.方法 通过RT-PCR克隆IFN-γ的成熟肽基因,从pGEX-6p-1/vp1中亚克隆猪脑心肌炎病毒(EMCV)抗原基因VP1,分别构建原核表达菌株pET32-a/VP1/Rosetta(DE3)和pET32-a/VP1/MulFN-γ,将VP1及VP1与MuIFN-γ在宿主菌Rosetta(DE3)进行表达与共表达.将表达的VP1及MuIFN-T/VP1蛋白分别免疫BALB/c小鼠,每次免疫2周后采血,分离血清,利用ELISA测定抗体效价.结果 表达的VP1蛋白分子量为60kD,共表达蛋白MulFN-γ/VP1分子量为73 kD,VP1及MulFN-WP1蛋白免疫小鼠测定的抗体效价分别为1:32000和1:128000.结论 表达的VP1蛋白具有良好的免疫原性,可刺激免疫小鼠产生明显的体液免疫反应.MulFN-γ/VP1免疫小鼠后产生的佐剂效果要强于弗氏佐剂.MuIFN-γ/VP1蛋白能增强小鼠的体液免疫水平,MulFN-γ具有一定的分子佐剂效应.