miR-320b通过靶向调控c-myc抑制人结直肠癌细胞增殖的实验研究

摘要

目的 探讨miR-320b对人结直肠癌细胞增殖的影响及其与c-myc的靶向关系.方法 选取30例结肠癌组织及其相应癌旁组织,人结直肠癌细胞株HCT-116、SW-480、SW-620、LOVO和HEK293,正常结肠上皮细胞NCM460,将miR-NC、miR-320b-mimics、pGL3、pGL3-c-myc分别转染到HCT-116和SW-480细胞内.采用实时荧光定量PCR法检测细胞、组织中miR-320b表达水平;MTT检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞c-myc表达水平;荧光素酶实验验证miR-320b与c-myc的靶向关系;免疫组织化学法检测组织中c-myc、Ki-67表达;裸鼠成瘤实验检测细胞的体外成瘤能力.结果 与正常结直肠组织比较,CRC组织中miR-320b水平显著降低(P＜0.01);与NCM460比较,4种CRC细胞株细胞miR-320b水平降低(P＜0.05).与正常结直肠组织比较,CRC组织中c-myc mRNA、蛋白表达水平明显升高(P＜0.01).miR-320b组细胞株细胞增值率低于NC组;miR-320b组2种细胞株G1期细胞百分率高于NC组,S期细胞百分率低于NC组(P均＜0.05).miR-320b组细胞第3、4周形成的肿瘤体积明显小于NC组(P＜0.001,＜0.001);miR-320b组肿瘤组织Ki-67阳性率明显低于NC组.转染miR-320b-mimic+WT-c-myc的两种细胞荧光素酶活性低于转染miR-NC+WT-c-myc组(P＜0.05);miR-320b组两种细胞c-myc蛋白表达水平低于NC组(P＜0.05).miR-320b+pGL3-c-myc组两种细胞72h时细胞增殖活性高于miR-320b组,低于pGL3-c-myc组(P＜0.01).结论 miR-320b可负性调控c-myc抑制结直肠癌HCT-116和SW-480细胞增殖能力.