Bex2对胶质瘤细胞自噬及对替莫唑胺敏感性的影响

摘要

目的:探讨Bex2对胶质瘤细胞自噬、对替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响及可能的作用机制.方法:①采用免疫组化法检测15例人脑胶质瘤组织和其癌旁正常组织中Bex2蛋白的表达.②将人脑胶质瘤U87 MG细胞分3组处理:空白对照组、siRNA-NC组、siRNA-Bex2组,后两组脂质体法转染相应质粒.qRT-PCR法检测细胞中Bex2 mRNA的表达,Western blot法检测Bex2和自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ、Beclin1和P62的表达,CCK-8法检测细胞增殖,计算增殖抑制率.用不同浓度(0、25、50、100、200μmol/L)TMZ处理3组细胞48 h后检测细胞增殖抑制率,评估细胞对TMZ的敏感性.③将U87 MG细胞分4组处理:siRNA-NC组,siRNA-NC+TMZ组(转染siRNA-NC后使用100μmol/L TMZ处理48 h),siRNA-Bex2组和siRNA-Bex2+TMZ组.荧光显微镜下观察4组细胞自噬情况,Western blot法检测自噬相关蛋白和AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平.结果:①人脑胶质瘤组织中Bex2阳性表达率为93.33％(14/15),高于癌旁正常组织(13.33％,2/15),P<0.001.②与空白对照组和siRNA-NC组比较,siRNA-Bex2组细胞中Bex2 mRNA和蛋白表达水平下降,Beclin1、LC3-Ⅱ表达水平下降,P62表达水平升高(P<0.05),细胞增殖抑制率升高,对TMZ的敏感性增强(P<0.05).③siRNA-Bex2和TMZ均可降低U87 MG细胞的自噬水平,同时降低细胞中AMPK磷酸化水平降,升高mTOR磷酸化水平(P<0.05).结论:下调Bex2表达可能通过抑制AMPK磷酸化和促进mTOR活化,抑制U87 MG细胞发生自噬,从而增强细胞对TMZ的敏感性.