逆转录病毒载体介导的RNAi对MCF-7细胞E2F1 mRNA表达的影响

摘要

目的:采用逆转录病毒载体介导的RNAi技术靶向抑制乳癌细胞MCF-7 E2F1 mRNA的表达.方法:构建重组的表达E2F1siRNA的逆转录病毒载体.将重组载体和空载体转染入MCF-7细胞中,共分9组:空载体组、未转染组和7个转染组.筛选出稳定转染的单克隆细胞扩大培养.应用RT-PCR方法检测转染细胞和未转染细胞E2F1 mRNA的表达情况.结果:筛选出7个转染逆转录病毒载体的单克隆,命名为SIR1～7,其E2F1 mRNA表达量分别为0.857±0.015,0.850±0.037,0.907±0.029,0.878±0.021,0.900±0.021,0.912±0.031,0.913±0.023;转染空载体和未转染的细胞E2F1 mRNA表达量分别为1.563±0.031和1.544±0.018;SIR1～7 E2F1 mR-NA表达量低于空载体及未转染组,差异有统计学意义(P＜0.05),SIR1～7 E2F1 mRNA表达均受到抑制;SIR1～7之间以及空载体转染与未转染组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:逆转录病毒载体介导的RNAi技术特异、高效抑制靶基因的表达,为肿瘤基因治疗提供了新的思路和工具.