人血管内皮生长因子mRNA靶向siRNA表达载体的构建和表达

摘要

目的:构建人血管内皮生长因子(VEGF)mRNA靶向siRNA表达载体,观察其表达情况。方法:设计人VEGF靶向的发夹样siRNA,依据设计,合成2条互补的寡核苷酸链,退火后连接入pSUPERneo-GFP载体,转化扩增后得到重组载体pSUPERneo-GFP-siVEGF,进行序列测定。用脂质体转染法将重组载体转染食管癌细胞株Eca109,采用RT-PCR检测转染细胞VEGF mRNA的表达水平。结果:经过酶切鉴定与测序,pSUPERneo-GFP-siVEGF构建成功。稳定转染该重组体的Eca109细胞VEGF mRNA表达水平明显降低。结论:成功构建了针对VEGF mRNA的siRNA载体,转染细胞后可显著抑制VEGF mRNA的表达。