抗人蛋白酶激活受体4单克隆抗体的制备与鉴定

摘要

目的:制备抗人蛋白酶激活受体4(PAR4)单克隆抗体(mAb)。方法:以hPAR4为免疫原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗PAR4mAb。采用Ig类与亚类鉴定试剂盒鉴定mAb的Ig类型,采用ELISA、点杂交、免疫组化染色法(人结肠、扁桃体及包皮组织)、流式细胞术、激光共聚焦显微镜(CLSM)技术鉴定mAb的特异性。结果:获得3株可稳定分泌抗PAR4mAb的杂交瘤细胞,其分泌的mAb均为IgM。免疫组化染色表明,mAb将人结肠组织中的腺上皮细胞、疑似肥大细胞和淋巴细胞,扁桃体组织中的淋巴细胞和包皮组织中的肥大细胞染成褐色。流式细胞术分析显示,3株mAb与A549细胞的PAR4均呈阳性反应。CLSM观察发现,荧光标记的阳性反应物主要位于A549细胞的胞质和胞膜上。结论:成功制备了抗PAR4mAb,为进一步的研究工作提供了有用的试剂。