利用酿酒酵母表达氯化钠胁迫下旱柳全长cDNA文库

摘要

为了研究旱柳Salix matsudana高耐盐无性系I-32的耐盐机制,分离其耐盐相关基因,实验以筛选出的高耐盐旱柳无性系I-32为材料,盐胁迫后提取总核糖核酸(RNA),纯化mRNA,利用改良SMART(switching mechanism at 5’end of RNA transcript)技术合成了全长cDNA,回收500bp以上cDNA大片段克隆到大肠杆菌Escherichia coli和酵母穿梭载体pYES2.1中,建成旱柳全长cDNA文库,对随机挑取的阳性克隆进行聚合酶链式反应(PCR)鉴定,插入片断平均值为1000bp左右,说明所构建的文库达到了用于目的基因分离筛选和表达的建库要求。通过尿嘧啶缺陷型培养基添加80～130g·L-1氯化钠筛选文库,与野生型酵母菌株相比,转化子的耐盐能力提高。研究结果为克隆与旱柳抗旱相关基因奠定了基础。