人源性rhG-CSF单链抗体基因的克隆和表达

摘要

从构建的噬菌体表面展示文库中,筛选出全新的人源抗重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)特异单链抗体(ScFv)的噬菌体克隆.ScFv被克隆到pCANTAB5E载体上,以E.coliTG1为宿主,进行噬菌体表面呈现,以rhGCSF为靶抗原进行免疫亲和富集筛选,经酶联免疫吸附试验(ELISA)鉴定,得到一株高亲和力克隆.DNA序列分析表明,该ScFv基因全长733bp,其中重链可变区(VH)为366bp,轻链可变区(VL)为322bp.抗rhG-CSF的ScFv在E.coliHB2151中以可溶形式分泌表达,产物主要分布于周质中,占周质总蛋白的质量分数为20%～25%,经免疫印迹试验(Westernblot)分析显示该单链抗体黏均分子量为31kD.