禽网状内皮增生病毒囊膜基因gp90的克隆表达及ELISA方法的初步建立

摘要

根据禽网状内皮组织增生症病毒（reticuloendotheliosis virus,REV）SNV株前基因组cDNA序列,经生物信息学分析,设计并合成引物,以四川分离株REV-SC1为模板,扩增囊膜基因gp90抗原性、亲水性较高的121~1 023 bp基因片段;将目的基因克隆至pMD-19T载体,进行测序和比对;将基因片段按正确的阅读框架定向克隆至pET-32a（＋）,转化大肠杆菌BL21（DE3）,以IPTG诱导表达,包涵体洗涤纯化,探讨以重组gp90蛋白为包被抗原初步建立检测REV的间接酶联免疫吸附试验（ELISA）方法.结果表明：1）REV-SC1株gp90核苷酸序列与在GenBank上已发表序列的同源性最高为99%,于231位、870位发生了2个碱基突变;2）SDS-PAGE分析表明表达蛋白分子质量约为45 ku,与预期分子质量大小相符;免疫印迹（Western-blot）结果表明重组蛋白具有生物学活性;3）间接ELISA检测方法的最佳抗原包被质量浓度为1.5 mg·mL-1,一抗稀释度为1∶320,临界值为0.126;特异性、敏感性试验结果良好.综上,本试验成功表达了REVgp90蛋白,并对其在ELISA检测方面的应用作了初步探讨.