小白鼠乳铁蛋白基因片段克隆及不同泌乳阶段乳铁蛋白基因表达的差异

摘要

从泌乳期小白鼠乳腺组织中提取总RNA,用反转录酶反转录为cDNA后,根据已报道的小白鼠乳铁蛋白(LF)cDNA设计一对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)进行扩增,获得一条897bp的片段,克隆于pGEM-TVector后进行序列分析表明,该片段为LF基因cDNA的部分序列,编码299个氨基酸组成的多肽,是成熟肽的主体部分.本研究得到的基因片段与已报道的小白鼠子宫LFcDNA部分序列的同源性达到99%.以LF基因片断的成功克隆为基础,本实验室构建了一优化的半定量RT-PCR法,以β-actin为内标,研究不同泌乳阶段小白鼠乳腺组织LF基因表达的差异.结果显示,不同泌乳阶段小白鼠LF基因表达有差异,在泌乳第1日,LF基因的表达量较高,从泌乳第1日到泌乳第10日和第18日,LF基因表达量呈下降趋势,到乳腺组织退化的干乳期(泌乳第25日),LF基因表达量又明显升高.