大黄鱼源杀香鱼假单胞菌外膜蛋白OmpA的原核表达及免疫原性分析

摘要

外膜蛋白A(OmpA)是革兰氏阴性菌主要的外膜蛋白之一,在多种致病菌中表现出较强的免疫原性,是具有潜力的候选疫苗.为分析大黄鱼内脏白点病病原杀香鱼假单胞菌OmpA类外膜蛋白的免疫原性,本研究选取了杀香鱼假单胞菌基因组中存在的3个OmpA类重组蛋白(依次命名为P1,P2,P5,Genbank收录号分别为EPB94769.1,EPB94930.1,EPB95835.1),通过构建pET30a-OmpA表达载体、转化BL21诱导表达、His标签纯化等技术,获得3个纯化的OmpA类重组蛋白,分子量大小依次为25 kD(P1),32 kD(P2),35 kD(P5).用制备的新西兰兔抗杀香鱼假单胞菌多克隆抗体,对获得的纯蛋白进行免疫原性Western Blot检测,结果表明:重组蛋白P1,P2,P5均能与兔抗发生特异结合,结合强度P5>P2>P1.本研究首次获得了杀香鱼假单胞菌OmpA重组蛋白并初步鉴定了其免疫原性,为杀香鱼假单胞菌的疫苗设计和筛选提供了有益参考.